41.正相色谱和反相色谱通常测试什么样品？

正相色谱常用于分离中等极性和极性较强的化合物，如酚类、胺类、羰基类及氨基酸 类等。 反相色谱常用于分离极性较弱的化合物，如 蛋白质、肽、氨基酸、核酸、甾类、脂类、脂肪酸、糖类、植物碱 、 农药、兽药等含有非极性基团的各种物质。 反相 色谱 在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个 高效液相色谱 应用的 80 左右。

2022-07-27

42.何谓正相色谱和反相色谱? 色谱固定相、流动相极性变化对不同极性溶质的保留行为有何影响?

采用亲水性固定相，疏水性流动相的为正相色谱，即体系中流动相极性小于固定相极性；采用疏水性固定相，亲水性流动相的为反相色谱，即体系中流动相极性大于固定相极性。 在正相色谱中，极性较低的组分先洗出。流动相极性增强，溶质洗出时间减少；在反相色谱中，极性较强的组分先洗出，流动相极性增强，溶质洗出时间增加。

2022-07-27

43.什么是学键合固定相，它有什么突出的优点？

化学键合相色谱是指利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面形成的固定相的色谱方法。 化学键合相色谱一方面通过控制化学键合反应，可以把不同的有机基团键合到硅胶表面上，从而大大提高了分离的选择性。另一方面可以通过改变流动相的组成来有效地分离非极性、极性和离子型化合物。 化学键合相色谱的优点： 一、适用范围广：几乎适用于所有类型的化合物的分离。 二、固定相稳定：由于键合到载体上的官能团不易被剪切而流失，这不仅解决了由于分配色谱固定液流失所带来的困扰，还特别适合梯度洗脱，为复杂体系的分离创造了条件。键合固定相对不太强的酸、各种极性溶剂都有很好的化学稳定性和热稳定性。 三、选择性多样：可以键合不同的官能团，能灵活地改变选择性，可应用与多种色谱类型及样品的分析。 四、柱性能高：键合固定相比一般液体固定相传质快的多，柱效高，使用寿命长，重现性好。

2022-07-27

44.化学抑制型离子色谱和非抑制型离子色谱的区别是什么？

化学抑制性离子色谱是在分析柱后，增加了一根抑制柱，这种双柱型离子色谱法称为化学抑制型离子色谱法。 非抑制型离子色谱是指使用低电导的流动相，如1×10-4 - 5×10-4 M的苯甲酸盐或邻苯二甲酸盐等，不仅背景电导较低，而且还不干扰样品的检测的离子色谱方法。 化学抑制型离子色谱及非抑制型离子色谱是离子色谱法的不同分类，原理上主要区别在于： 化学抑制性离子色谱是在分析柱后，增加了一根抑制柱，抑制柱中装填与分离柱电荷相反的离子交换树脂，使得具有高背景电导的流动相转变成低背景电导的流动相，这种离子色谱法不仅降低了强电解质背景对电导检测器的干扰，而且检测的灵敏度也有较大提升。 而非抑制型离子色谱则是使用了低电导的流动相，如1×10-4 — 5×10-4 M的苯甲酸盐或邻苯二甲酸盐等，不仅背景电导较低，而且还不干扰样品的检测。这种方法不必加抑制柱，只使用分析柱，同时也被称为单柱型离子色谱法。

2022-07-27

45.离子交换色谱、离子色谱、离子对色谱的区别是什么

离子交换色谱法是利用离子交换原理和液相色谱技术来测定溶液中阳离子和 阴离子 的一种分析方法。 离子色谱法是由离子交换色谱派生出的一种分离方法主要是为了消除流动相中强电 解质背景离子对电导检测器的干扰。 离子对色谱法是将一种或多种与溶质分子电荷相反的离子称为对离子或反离子加 到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物，从而控制溶质离子保留行为的色谱分析方法 。 三者的区别在于，离子交换色谱法与离子色谱法都是利用离子交换原理和液相色谱技 术来测定溶液中阳离子和阴离子 的一种分析方法；而离子对色谱法则是在色谱体系中引入离子对试剂，从而改变溶质在两相中的分配，使离子性溶质的保留行为和分离选择性发生。

2022-07-27

46.液相色谱法有几种类型?它们的保留机理是什么?在这些类型的应用中，最适宜分离的物质是什么?

液相色谱法有以下几种类型：吸附色谱法；分配色谱法；离子交换色谱法；离子色谱法；离子对色谱法、排阻色谱法等。 吸附色谱是通过组分在两相间的多次吸附与解吸平衡实现分离的。最适宜分离的物质为中等相对分子质量的油溶性试样，凡是能够用薄层色谱分离的物质均可用此法分离。 分配色谱的保留机理是通过组分在固定相和流动相间的多次分配进行分离的。可以分 离各种无机、有机化合物。化学键合色谱是分配色谱法的特殊情况；固定相主要由担体和特定的有机官能团所构成，由于键合基团不能全部覆盖具有吸附能力的载体，所以同时遵循吸附和分配的机理。其中反相色谱常用于分离极性较弱的化合物，如化合物，如蛋白质、肽、氨基蛋白质、肽、氨基酸、核酸、甾类、脂类、脂肪酸、糖类、植物碱酸、核酸、甾类、脂类、脂肪酸、糖类、植物碱、、农药、兽药等含有非极性基团的各种物农药、兽药等含有非极性基团的各种物质。 离子交换色谱法是利用离子交换原理和液相色谱技术来测定溶液中阳离子和法是利用离子交换原理和液相色谱技术来测定溶液中阳离子和阴离子阴离子的的一种分析方法。一种分析方法。主要是用来分离离子或可离解的化合物。应用于无机离子的主要是用来分离离子或可离解的化合物。应用于无机离子的分离分离，，也可以也可以用于用于有机和生物物质，如氨基酸、有机和生物物质，如氨基酸、核酸、蛋白质等的分离。核酸、蛋白质等的分离。 离子色谱色谱法是由是由离子离子交换色谱派生出的一种交换色谱派生出的一种分离分离方法方法，，主要是为了消除流动相中强电主要是为了消除流动相中强电解质背景离子对解质背景离子对电导检测电导检测器的干扰。器的干扰。与与离子交换色谱类似离子交换色谱类似，离子色谱法，离子色谱法可以用来分离离子可以用来分离离子或可离解的化合物。可应用于无机离子的或可离解的化合物。可应用于无机离子的分离分离，，也可以用于也可以用于有机和生物物质，如氨基酸、有机和生物物质，如氨基酸、核酸、蛋白质等的分离。核酸、蛋白质等的分离。 在离子对色谱色谱中，样品组分进入色谱柱后，组分的离子与对离子相互作用生成中性化合物，从而被固定相分配或吸附进而实现分离的。各种有机酸碱特别是核酸、核苷、生物碱等的分离是离子对色谱的特点。 排阻色谱是利用凝胶固定相的孔径与被分离组分分子间的相对大小关系，而分离、分析的方法。主要被用于分离高分子化合物，如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等；近年来，凝胶色谱也广泛用于小分子化合物。

2022-07-27

47.离子对试剂的作用及原理是什么？

离子对试剂是指加到流动相或是固定相中能产生一种或多种与溶质分子电荷相反的离子的物质，产生的离子能够与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物，从而达到使目标物在色谱柱上有效保留的目的。 用于分离酸性化合物时一般选用四丁基氢氧化铵 、四丁基溴化铵、十二烷基三甲基 氯化铵等离子对试剂。 用于分离碱性化合物时，一般选用戊烷磺酸钠、己烷磺酸钠、 庚烷磺酸钠、癸烷磺酸 钠、十二烷基磺酸钠等离子对试剂 。 选用离子对试剂时，一般尽可能优先选用碳链短的离子对试剂，浓度尽量的低，这样 可以有效避免离子对试剂强保留对色谱柱产生的不可逆影响 。

2022-07-27

48.流动相中加入离子对的目的、效果、作用分离原理是 什么 ？怎么选择加入的离子对试剂，加入量如何选择？

加入离子对试剂的目的，是为了在流动相或是固定相中产生一种或多种与溶质分子电荷相反的离子的物质，产生的离子能够与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物，从而达到使目标物在色谱柱上有效保留的目的最终实现分离。在选择离子对试剂的时候，首先需要考虑目标物的理化性质，通常在用于分离酸性化合物时一般选用四丁基 氢氧化铵、四丁基溴化铵、十二烷基三甲基氯化铵等离子对试剂。 在分离碱性化合物时，一般选用戊烷磺酸钠、己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠等离子对试剂。同时选用离子对试剂时，一般尽可能优先选用碳链短的离子对试剂，浓度尽量的低这样可以有效避免离子对试剂强保留对色谱柱产生 的不可逆影响。离子对试剂的加入量要尽量的少在一定范围内，离子对加入量跟目标物保留正相关 由于跟固相存在作用，所以一旦超过浓度，不仅不会增加目标物保留，反而会减少。 一般长链离子对试剂加入浓度在 0. 5mmol/L 左右短链离子对试剂加入浓度在5mmol/L 左右，根据情况可适当增加，原则上不超过推荐浓度的2倍。

2022-07-27

49.流动相中加入离子对的目的、效果、作用分离原理是 什么 ？怎么选择加入的离子对试剂，加入量如何选择？

如果是确定互不相溶的话，当溶解样品的试剂与流动相混合的时候，各种物质在不同 溶剂中的分配系数发生了变化，有可能会发生物质析出的情况，也就有可能会堵塞色谱柱。最主要的是，如果互不相溶，这样的流动相体系就无法将目标物有效分离，这已经不能适用于分配色谱法的基本原理了，即便目标物在色谱柱上有所保留，也很难 想象其分离效果。 建议参考国标，或是文献方法，更换样品溶剂优化流动相体系，已达到最好的分离效果。

2022-07-27

50.什么是基线：

当色谱柱中仅有流动相通过时，检测器所产生的响应信号的曲线。稳定的基线应该是一条接近于水平的直的线，反应的是随着时间变化的检测器系统噪声值。 基线漂移 baseline drift ：基线随时间定向的缓慢变化。 基线噪声 baselinenoise N ：由于各种原因而引起的基线波动。

2022-07-27